Identifizierung von Metaboliten
Zebrafischlarven werden vier Tage nach der Befruchtung 24 Stunden lang mit einem Wirkstoff (Substrat) behandelt und dann zweimal mit einem substratfreien Fischmedium gewaschen. Die gereinigten Larven werden euthanasiert, indem sie 15 Minuten lang in Eiswasser gelegt und dann in flüssigem Stickstoff eingefroren werden. Anschließend werden die Larven 4 Stunden lang gefriergetrocknet. Die gefriergetrockneten Larven werden mit Methanol extrahiert, und der Metaboliten enthaltende Überstand wird mittels LC-hrMS/MS analysiert. Als Negativ-Kontrollgruppe dienen Larven, die mit 1% (v/v) DMSO behandelt wurden.
Die Expositionskonzentration wird auf der Grundlage zuvor durchgeführter Toxizitätsergebnisse bestimmt. Die Datensätze können durch MSI ergänzt werden, um die räumliche Verteilung von Wirkstoffen und Metaboliten zu untersuchen.
- Park YM, Meyer MR, Müller R, Herrmann J. Drug administration routes impact the metabolism of a synthetic cannabinoid in the zebrafish larvae model. Molecules. 2020;25(19):4474. doi:10.3390/molecules25194474
- Richter LHJ, Herrmann J, Andreas A, Park YM, Wagmann L, Flockerzi V, Müller R, Meyer MR. Tools for studying the metabolism of new psychoactive substances for toxicological screening purposes – A comparative study using pooled human liver S9, HepaRG cells, and zebrafish larvae. Toxicology Letters. 2019;305:73-80. doi:10.1016/j.toxlet.2019.01.010
- Jones HS, Panter GH, Hutchinson TH, Chipman JK. Oxidative and conjugative xenobiotic metabolism in zebrafish larvae in vivo. Zebrafish. 2010;7(1):23-30. doi:10.1089/zeb.2009.0630
Dr. Jennifer Herrmann
Helmholtz Institute for Pharmaceutical Research Saarland (HIPS)
Department of Microbial Natural Products
66123 Saarbrücken
jennifer.herrmann@helmholtz-hips.de
Reduction of animal experiments prior to (pre-)clinical stages through early in vivo metabolic profiling in zebrafish larvae